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本制品为科研实验精心研制的多用途PCR扩增预混液，在扩增速度、扩增长度、扩增灵敏度、扩增产量、扩增保真度五项指标中，对应其它聚合酶和Mix比较来看，其每一项并不一定是最佳，但每一项都是顶级性能。该高保真PCR Mix综合的各项顶级性能使其成为PCR扩增独一无二的选择，常规科研实验室中，无需备用品种繁多的各类聚合酶及Mix制品，一款PCR扩增预混液即可满足科研实验室所有的需求。

本制品采用的Multi-Purpose DNA聚合酶具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的外切酶活性，其保真度高于Pfu DNA聚合酶2～3倍（约为Taq酶的40倍）。扩增体系中含有独有的增强因子和缓冲系统，使其具有超高的扩增成功率。该系列制品可扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有4kb/min以上的延伸速度。

• 扩增性能
  

  图1．0.5～8kb扩增模板为gDNA复杂模板，20kb扩增模板为λ DNA模板。	图2．高GC含量模板的扩增：以人基因组DNA为模板扩增1250bp的高GC(67%)含量片段，在1xQ Solution的协助一下，可扩增0.4ng的基因组DNA模板。

  
  
• 高灵敏度扩增性能
  
  图3．在20μL的PCR扩增体系中加入0.1～50ng的gDNA进行30个循环的PCR扩增，可见本制品可以很好的扩增出0.1ng模板，扩增片段2.2kb。
  
• 保真度性能
  
  图4．使用DNA聚合酶对模板DNA进行35个循环的PCR扩增后，对PCR产物进行NGS测序。结果表明本制品的保真能力高于Taq和Pfu DNA聚合酶。

• 引物、模板、酶浓度使用参考表
  

  在1×反应体系下	引物浓度(nM)	酶浓度(U/μL)	模板浓度(ng/μL)
  <2kb	200	0.02	基因组(0.01～1) 简单模板(0.01～0.1)
  2～4kb	100	0.03	基因组(0.05～2) 简单模板(0.01～0.1)
  >4kb	100	0.04	基因组(0.5～4) 简单模板(0.05～0.1)

• 扩增片段GC含量>60%时，推荐添加5×PCR增强剂至1×浓度，来提升高GC含量的扩增性能。

• 按下表加入各成分配制PCR反应液
  

  成分	用量
  2×HiFi Buffer Mix	10μL
  Multi-Purpose DNA聚合酶(0.4U/μL)	1μL
  上游引物(10μM)	0.4μL
  下游引物(10μM)	0.4μL
  模板DNA	X μl
  ddH2O	至20μL

  • HiFi Buffer Mix包含：反应缓冲盐、dNTP、Mg²⁺、溴酚蓝。
• 推荐的PCR扩增程序：
  

  过程	温度	时间
  		<1kb	1～2kb	>2kb
  预变性	95℃	1min	1min	1min
  循环1 (5个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	65℃	30s	45s	30s/kb
  循环2 (23个循环)	95℃	10s	10s	10s
  	55℃	10s	10s	10s
  	72℃	30s	45s	30s/kb
  末延伸	72℃	2min	2min	2min

  • 在实际应用中，引物TM值（50～70℃）范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28（5+23），如产物扩增亮度不足，则增加循环2的次数到25～28个，通常不宜超过28。
    
  • 如果仍然不能获得良好的扩增结果，则可以改变，循环2中的退火温度为50～65℃（上表中为55℃）。